Eppendorf AF2200 Plate Reader - Manual (Página 40)

Manejo
Eppendorf
® PlateReader AF2200
Español (ES)
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U es la tensión, gain (ganancia) es la amplificación seleccionada, 255 la mayor amplificación posible y 1250
V la mayor tensión de suministro posible del PMT. Ejemplo: una amplificación de la señal (= ganancia) de
100 corresponde a una tensión de suministro de 490 V:
6.3.3 Ajustes de destellos
Las mediciones rápidas con 1 destello (medición) por pocillo son posibles con todos los tipos de placa. La
precisión de medición con una intensidad luminosa menor depende, sin embargo, del tiempo de medición,
durante el cual se puede recibir la señal de fluorescencia.
Para la fluorescencia instantánea no ayuda aumentar el tiempo de integración estándar, ya que el detector
no recibe ninguna señal más después de que el destello haya desaparecido.
6.3.4 Tiempo de reposo
Antes de medir un pocillo puede ajustarse un tiempo de reposo. Mediante el movimiento "Stop and Go" del
soporte de placas, puede que el menisco del líquido dispensado siga vibrando mientras se integra la señal.
Esto puede provocar fluctuaciones de los valores medidos. Este efecto se ha observado en pocillos de
placas de 96 pocillos y en pocillos más grandes.
6.3.5 Filtros recomendados
Para garantizar un fondo aceptable, el valor de corte superior para longitudes de onda de excitación y el
valor de corte inferior para longitudes de onda de emisión deben separarse. Este compromiso depende de
las propiedades del filtro. En muchas moléculas fluorescentes se puede amplificar la señal, ampliando el
ancho de banda del filtro del otro paso de banda.
6.3.6 Tipos de microplacas recomendados
En general, para una alta sensibilidad de la fluorescencia se recomienda utilizar microplacas negras. Para la
medición en el modo Fluorescencia abajo, recomendamos utilizar placas negras con fondo transparente. No
debería utilizar volúmenes de menos de un tercio del volumen máximo. Al utilizar volúmenes inferiores,
compruebe si dispone de un tipo de placa adecuado.
Aumente el número de destellos (mediciones) por pocillo hasta que el ruido de los pocillos
vacíos no continúe mejorando o el tiempo de medición por pocillo sea inaceptable.
Si los valores máximos para excitación y emisión de un fluoróforo son similares, no deben
pasarse directamente a longitudes de onda centrales para filtros de fluorescencia.
V = 490V 1250 *
255
100
U =