Hoefer SE900 - Manual (Página 18)

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Prepare la solución de acrilamida
1 Véase el Apéndice A para las recetas de SDS-PAGE. Para colada seis
SE9102-1-1.0 geles, 400 ml que se necesita.
2 Desairear la solución de gel durante 5 minutos. Añadir el (iniciador)
10% w/v APS y el (catalizador) 10% v/v TEMED* justo antes de mold-
ear los geles. Verter la solución de gel en el canal en la parte posterior
del lanzador. La solución fluirá por el canal y llenar los casssettes
desde la parte inferior (Fig. 15).
* El TEMED se diluye a 10% para una mejor distribución durante el
mezclado de las soluciones de gel.
3 Verter la solución como una corriente lenta y continua. Prueba para
minimizar la introducción de burbujas de aire en el flujo.
4 Completa solución a 0,5-1 cm por debajo de la parte superior de la
placa de vidrio para dejar espacio para la tira IPG y un sello de agarosa.
5 Superponer cada gel con una delgada capa de agua saturada de
n-butanol o tampón de gel diluido para obtener la mejor superficie en
la parte superior del gel. Lentamente aplicar la superposición cerca de
la superficie del gel de un lado, teniendo cuidado de evitar la mezcla.
Deje que la superposición de fluir a través de la superficie sin ayuda
(Fig. 16).
6 Permitir que el gel se polimeriza aproximadamente una hora.
7 Eliminar la superposición de un enjuague la parte superior del gel
varias veces con agua destilada. Utilizar una solución tampón de gel
diluido como un enjuague final.
8 Opcional de almacenamiento: Los geles segunda dimensión puede ser
almacenada temporalmente en la máquina de colada.
Los geles segunda dimensión también se puede quitar de la máquina
de colada y se almacena 1-2 días sumergidos en una solución tampón
de gel antes de su uso. Hay un riesgo de que con un almacenamiento
prolongado, el agua geles abosrb, y el casete se abre parcialmente,
conduciendo a sesgadas frentes de tinte.
Fig 15. Se vierte la solución en una
corriente continua lenta.
Fig 16. Aplicando superposición.
Nota: Un gel de apilamiento se puede usar si
se desea, pero no es necesaria.
Nota: Es necesario eliminar las
superposiciones de butanol antes de guardar
los geles en el lanzador. Dejando butanol en
el lanzador puede conducir a blanquear y
fragilidad del acrílico.
¡Atención! La acrilamida es una neurotoxina.
El cuidado extremo debe ser utilizado en el
manejo y la preparación de soluciones de
acrilamida.