Hoefer SE900 - Manual (Página 33)

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9. 1% de agarosa en tampón de electroforesis 1X
(100 ml)
En un matraz de 500 ml añadir:
Agarosa
1 g
10X tampón de electroforesis (Solución #8) 10 ml
H
2
O desionizada 90 ml
Azul de bromofenol 3 mg
Agite suavemente la suspensión de agarosa.
El calor a baja potencia en un horno de microondas hasta que agarosa se
haya disuelto completamente.
Divida en tubos de ~1,5 ml de los tornillos superiores de plástico.
Almacenar en alícuotas a 4 °C.
10. Gel de Gradiente fundición Solución Desplazamiento
(50% de glicerol en 0,375 mM TrisCl 8,8, SDS al 0,1%, 200 ml)
Glicerol
100 ml
1,5 M pH 8,8 TrisCl (Solución #2) 50 ml
H
2
O desionizada 50 ml
Azul de bromofenol 3 mg
Mezclar bien.
11. Equilibrio SDS Solución tampón
Esta solución se utiliza después de IEF, y antes de PAGE segunda dimen-
sión. Las tiras IPG se sumergen en exceso de disolución para elevar el pH
del tampón de tira de modo que sea adecuado para PAGE, y para recubrir
las proteínas en SDS uniformemente de modo que migran correctamente en
el gel de segunda dimensión.
Prepara 200 ml
(6 M urea, 75 mM Tris-HCl pH 8,8, 29,3% de glicerol, 2% de SDS,
0,002% de azul de bromofenol)
Concentración final Cantidad
Urea (FW 60.06) 6 M 72,1 g
1,5 M de Tris-HCl, pH 8,8 solución madre 75 mM 10,0 ml
Glicerol (87% w/w) 29,3% (v/v) 69 ml
SDS (FW 288.38) 2% (w/v) 4,0 g
Azul de bromofenol 0,002% (w/v) 4 mg
H
2
O desionizada a 200 ml
Dividir en partes alícuotas en alícuotas de 30 ml y conservar congelada a
-20 °C o menos.
24 cm de IPG requieren 5-10 ml por tira por el paso de equilibrio. Más cortas
tiras puede utilizar el volumen proporcionalmente menos por paso Equilibrios.
¡Atención! Hoja de Seguridad puede hacer
que la solución a hervir lo tome precauciones
al calor y evitar que se desborde.
Nota: Las tiras de IPG deben equilibrarse
justo antes de la segunda dimensin
PÁGINA. No se equilibren las tiras IPG
antes de guardar a -20 °C.