Hoefer SE900 - Manual (Página 19)

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Geles de gradiente
Geles de gradiente lineal se puede lanzar con un accesorio opcional, el
fabricante de Hoefer SG500 degradado. La mezcla SG500 porcentaje
de bajo y alto porcentaje de gel soluciones que se bombea en el puerto
en la parte inferior de la máquina de colada de gel múltiple utilizando
una bomba peristáltica.
Verter un gel de gradiente lineal
1 Montar el lanzador múltiple de gel como se describe en la página 11,
con las siguientes excepciones:
• No inserte la junta de goma triangular en la parte inferior de la
máquina de colada de gel.
• Retire la tapa del orificio de entrada de la parte inferior.
2 Conecte un extremo del tubo de grado de laboratorio para el puerto
de salida SG500. Insertar el tubo a través de una bomba peristáltica,
y conectar el otro extremo al puerto de entrada de la placa frontal
SE915 múltiple lanzador de gel.
3 Calcular el volumen de solución de monómero sea necesario. Divida el
volumen total a la mitad y la preparación de este volumen tanto de las
soluciones de mayor y menor porcentaje de acrilamida.
4 Opcional: Ajuste la solución de acrilamida de mayor porcentaje al
15% (w/v) de sacarosa o de hasta 25% (v/v) de glicerol para mejorar
estratificación.
5 Verter el porcentaje más alto, o solución pesada, la acrilamida en la
cámara SG500 más alejado de la salida. Abra la llave de paso el tiempo
suficiente para desplazar el aire entre las cámaras y luego cierre.
6 Verter el porcentaje más bajo, o más ligero, solución de acrilamida en
la cámara de mezcla, la cámara con la salida SG500.
7 Coloque una barra de agitación en la cámara de mezcla. Coloque el
fabricante de gradiente sobre un agitador magnético, y comenzar agit-
ación a una velocidad que se mezcla bien, pero no introducir burbujas
en la solución.
8 Encienda la bomba peristáltica a un nivel bajo, y abra la llave de paso
entre las dos cámaras SG500.
9 La solución de gel debe lentamente capa en la región triangular en
la parte inferior de la máquina de colada de gel múltiple, y llenar los
casetes uniformemente desde el fondo hasta la parte superior.
10 Una vez que casi toda la solución haya salido de la pausa fabricante
de la bomba de gradiente de forma temporal, y llenar la fábrica de
gradiente con ~200 ml de la solución de desplazamiento. Reinicie la
bomba y bombear la solución a través de la tubería, obligando a las
soluciones de acrilamida hasta en los casetes de gel hasta la altura
deseada. Parar la bomba.
11 Superponer cada gel con 1 ml de agua saturada de n-butanol o
tampón de gel diluido para obtener la mejor superficie del gel superior.
Lentamente entregar la solución de superposición en un lado, mini-
mizando la mezcla, y permitir la superposición a fluir a través de la
superficie superior sin ayuda.
12 Permitir que los geles para polimerizar durante un mínimo de una
hora. Después de la polimerización, se vierte la superposición y
enjuagar la superficie del gel varias veces con agua destilada.
13 Prepare la solución de gel monómero de apilamiento. Verter el gel
de apilamiento en la parte superior del gel de resolución. Permita un
mínimo de una hora para el gel de apilamiento para polimerizar.
Nota: Es una buena idea para practicar con el
agua y la bomba peristáltica para determinar
empíricamente los volúmenes y las tasas de
flujo para echar buenos geles de gradiente.
Nota: La solución de desplazamiento
se requiere. El gradiente no se formará
correctamente sin desplazar la acrilamida en
el interior de los casetes. También ayuda a
mantener la acrilamida de polimerización en
el tubo y en la parte inferior de la máquina
de colada, lo que simplifica la limpieza. La
solución desplazamiento no debe entrar en la
parte inferior de los cassettes.
Nota: Evite el contacto de las burbujas de
aire en la tubería de la bomba, las burbujas
de aire va a interferir con la formación de
pendiente adecuada.